Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病征进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现呼吸道自身免疫到浮现1改进型肝炎临床疼痛的十分困难率在青少年时期就有很好的叙述，多个呼吸道自身免疫无疼痛的青少年之中有70%在血清类比后10年内肺结核肝炎，而随访15年的青少年这一分之一减少到84%。相越来越为之下，占去临床1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的发作前提还从未获得确实的研究工作。

越来越多的人开始应用于再行的系统来下定义1改进型肝炎的十分困难：个体在浮现多种呼吸道自身免疫时转入第1收尾，浮现血糖精神状态时转入第2收尾，浮现疼痛时转入第3收尾。一些多发呼吸道自身免疫无疼痛的个体，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为发作的1改进型肝炎。我们之前叙述了一第三组在首次检验到多种呼吸道自身免疫取样后至少10年无肝炎的极慢十分困难者，这第三组病人人数少，但特征非常明确。随后，我们发现呼吸道自身肝细胞特异性CD8+T细胞会中间体在十分困难比较慢的病人之中基本不长期存在，但在近来发作和依然长期存在的肝炎病人之中很很难检验到。这显然表明，与十分困难病人相越来越为，这些病人自身突变的可调强化。

早期研究工作表明，尽管可调性T细胞会(Treg)数量情况下，但肝炎病人长期存在一些功用缺陷，其之中包括对IL-2的中间体战斗能力提高。此外，肝炎病人之中的effectCD4+T细胞会显然对可调极具抵抗性，展现出为effectT细胞会的抑制作用消退，自然消除的Treg和体外消除的诱导Treg，以及肝细胞境遇的CD4+T细胞会之中IL-2中间体消退。本研究工作的目的是叙述了CD4+可调性T细胞会(Treg)在一小群极比较慢十分困难者之中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

法则：BOX研究工作是一项以许多人为基础的纵向研究工作，在21岁一般而言肺炎的病人亲属之中检查1改进型肝炎的危险因素。我们之前叙述了依然比较慢十分困难者的特征，他们保持多重呼吸道自身免疫无疼痛最多10年，但从未浮现肝炎的临床疼痛，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名暂时保持无肝炎并愿意提供大量体内取样的比较慢十分困难者纳入T和B细胞会功用归纳。在以外的研究工作之中，8名慢十分困难者(SP第三组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身免疫无疼痛。所有的旁观者都位处1改进型肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后一落千丈了呼吸道自身免疫对某些肝细胞的无疼痛中间体，然而，一名病人从未位处2期至少6年，但从未浮现临床疼痛，一名病人被诊断为肝炎，该人脑72岁，在通过观察实验取样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在建模之中对该ADP完成了单独指标。转化外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多模板流式细胞会妖术和T细胞会抑制作用试验指标ADP之中Treg的频谱、遗传基因和功用。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、总括和回归)完成无监督聚类归纳，指标Treg遗传基因。

结果：与健康ADP相越来越为，来自慢十分困难体的潜意识CD4+T细胞会的监督聚类说明了，抑制作用的潜意识CD4+ Treg频谱减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解减少有关。一名HbA1c增大的病人与十分困难比较慢者和匹配的印证第三组相越来越为，Treg谱有所有所不同。功用最近，与健康ADP相越来越为，来自比较慢十分困难体的Treg介导的CD4+effectT细胞会抑制作用轻微损伤。展现出为对effectCD4+T细胞会CD25和CD134理解的抑制作用减少。

平面图1 侧重的遗传基因归纳说明了，CD4+Treg亚改进型在慢十分困难队列之中减少。由FlowSOM作用于的Treg四楼，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物理解确认出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个有所不同Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个终端值得一提的是一个战略性(100个战略性)，越来越大的元战略性(10个元战略性)在终端第三组周围上色。每个终端之中的饼平面图问到单个上标的理解级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整体上标理解。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)作用于平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相越来越为之下丰度为每个metacluster箱中央线平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。绿色红色值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg频谱的减少是十分困难比较慢的标志。基准暂时性(a - f)和水果归纳(g-k)越来越为SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR理解完成转化，模拟器FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第三组以及ADPSP 606(绿色)之中CD25+ cd127的频谱概述平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性空集的箱中央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解低压着色，箭头引人注目的簇被比对为SP和HD队列错综复杂的有所不同。(j)箱中央线平面图说明了了在SP(杂色)和HD(灰点)第三组之中，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相越来越为之下丰度(分之一)。(k)直方平面图说明了每个簇的遗传基因(黄色)和Treg上标相越来越为之下理解与着重理解(紫色);上列，缓存Treg_3;请注意一行，缓存Treg_4。着重与所有其他簇之中上标的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

平面图3 与健康献血者相越来越为，十分困难比较慢者潜意识treg的GITR减少。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个理解上标的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR理解串联，说明了直方平面图(c)和概述平面图(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有ADP包括，p< 0.05(紫色)ADPSP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR理解，从基准暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)串联，说明了直方平面图(e)和概述平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

平面图4 来自比较慢十分困难的CD4+ treg细胞会操纵effectCD4+T细胞会的战斗能力提高。SP第三组用紫色的中央线和红色问到，HD第三组用黑色的中央线和红色问到，绿色的中央线/红色问到ADPsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按观察的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培植3当晚完成流式细胞会妖术检验。(a-d)与CD4+接收者者相越来越为之下应的treg培植(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。应用于无疼痛印证(抑制作用的拥护细胞会都有treg)计算抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重越来越为测试

平面图5 effectCD4+T细胞会对比较慢十分困难的T细胞会再造的抑制作用越来越引人注目。SP第三组用紫色的中央线和红色问到，HD第三组用黑色的中央线和红色问到，绿色的中央线/红色问到ADPsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按观察的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培植3当晚完成流式细胞会妖术(CD25反染)和细胞会因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用调升(b)。(c,d) CD25抑制作用调升(c)和CD134抑制作用调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重越来越为测试

结论：我们得出结论的结论是，来自比较慢十分困难子的再造潜意识CD4+Treg在GITR理解之中获得了适配和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1改进型肝炎风险个体之中的异质性的实质。

书名记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28